本文使用cleanert pep-2固相萃取柱、venusil mp c18色谱柱和qdaura卓睿全自动固相萃取仪，遵照中华人民共和国国家标准《猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定（gb/t 20752-2006）》提供的方法，检测猪肉中的4种硝基呋喃类代谢物残留。
(1) 样品信息：
(2) 样品提取及衍生
2.1提取
称取猪肉样品2g(精确到0.01g)，置于50ml棕色离心管中，加入15ml甲醇-水混合溶液(v：v=2：1)，均质1min，再用5ml甲醇-水混合溶液洗涤刀头，二者合并8000r/min离心5min，吸取上清液倒掉。
注：为更好的消除基质效应对检测结果造成的影响，可加入同位素内标，采用内标法定量检测。
2.2 水解和衍生(注意避光)
向棕色离心管中加入20ml 0.2mol/l的盐酸溶液，涡旋1min使之混合均匀，之后加入0.3ml浓度为0.05mol/l的2-硝基苯甲醛，混匀，于37℃温水中避光衍生16小时。
2.3 净化处理
将衍生后的样品冷却至室温，加入5ml 0.1mol/l的磷酸氢二钾，并用1mol/l的氢氧化钠溶液调ph约为7.4，混合均匀。之后用8000r/min离心10min,以小于2ml/min的流速过cleanert® pep-2小柱(规格为60mg/3ml，用5ml甲醇、5ml水活化)，并用10ml的水洗涤固相萃取小柱，然后负压抽干柱子15min。用5ml乙酸乙酯洗脱于20ml棕色瓶中(此过程可在qdaura®卓睿全自动固相萃取仪上完成，仪器方法见图1)。洗脱液于40℃下氮气吹干。
用样品定容溶液(10ml乙腈，0.3ml的乙酸用水稀释至100ml)定容至1ml，充分溶解，并用0.22μm滤器过滤。
图1 卓睿全自动固相萃取仪自动净化方法：
(3) 检测方法
色谱柱：venusil mp c18 2.1×150mm，5μm，100å
质谱仪：api 4000
流动相：a:0.1%甲酸的水溶液 b:0.1%甲酸的乙腈溶液
流 速：0.2ml/min
进样量：5μl
离子源：电喷雾(esi)，正离子模式
扫描方式：多反应监测(mrm)
表1 梯度洗脱条件：
| 时间(min) | a(%) | b(%) |
| 0 | 80 | 20 |
| 1 | 80 | 20 |
| 3 | 50 | 50 |
| 7 | 25 | 75 |
| 7.1 | 5 | 95 |
| 10 | 5 | 95 |
| 10.1 | 80 | 20 |
| 16 | 80 | 20 |
表2 质谱仪离子源参数：
| source/gas | |
| collision gas(cad) | 6 |
| curtain gas(cur) | 15 |
| ion source gas 1(gs 1) | 50 |
| ion source gas 2(gs 2) | 50 |
| ion spray voltage(is) | 5500 |
| temperature(tem) | 600 |
| interface heater(ihe) | on |
表3 4 种硝基呋喃待测物母离子和子离子参数表：
| 物质名称 | 保留时间(min) | 监测离子对 | dp | ep | ce | cxp |
| sem | 8.1 | 209.1/166.1 | 51 | 10 | 17 | 10 |
| 209.1/192.1 | 51 | 10 | 17 | 10 | ||
| ahd | 8.3 | 249.2/134.1 | 61 | 10 | 20 | 10 |
| 249.2/104.1 | 66 | 10 | 31 | 10 | ||
| aoz | 8.89 | 236.2/134.1 | 61 | 10 | 20 | 10 |
| 236.2/104.1 | 56 | 10 | 31 | 10 | ||
| amoz | 3.12 | 335.3/291.2 | 46 | 10 | 19 | 10 |
| 335.5/128.1 | 46 | 10 | 19 | 10 |
(4) 实验结果：
图2 4 种硝基呋喃代谢物总离子图：
图3 sem(209/166) 质谱图：
图4 aoz(236/134) 质谱图：
图5 ahd(249/134) 质谱图:
图6 amoz(335/291) 质谱图：
表4 猪肉中0.5ppb 加标回收实验结果：
| 名称 | 1(%) | 2(%) | 3(%) | 平均回收率(%) | rsd(%) |
| amoz | 109.43 | 97.84 | 109.75 | 105.67 | 6.42 |
| sem | 91.81 | 88.91 | 88.22 | 89.65 | 2.12 |
| ahd | 80.68 | 82.11 | 77.25 | 80.01 | 3.12 |
| aoz | 83.94 | 80.7 | 80.85 | 81.83 | 0.02 |
实验结论 ：qdaura卓睿全自动固相萃取仪整机采用密封避光设计，用其进行硝基呋喃代谢物的前处理操作，全净化过程可在避光条件下进行，保证检测结果的准确性和重现性。cleanert pep-2固相萃取柱和venusil mp c18色谱柱完全可以满足国标对于硝基呋喃代谢物的检测要求，结果准确可靠，重现性好。
| 产品名称 | 规格包装 | 订货号 |
| qdaura卓睿全自动固相萃取仪 | 4通道24位 | spe-40 |
| cleanert pep-2固相萃取柱 | 60mg/3ml，50支/包 | pe0603-2 |
| venusil mp c18液相色谱柱 | 2.1×150mm, 5μm, 100å | va951502-0 |
| 针式过滤器(nylon) | 0.22μm,直径13mm,200个/pk | as021320 |
| 一次性无针头注射器 | 5ml,100/pk | zsq-5ml |
| 1.5ml样品瓶 | 棕色,100/pk | 1109-0520 |
| 1.5ml样品瓶盖 | 100/pk | 0915-1819 |
| 甲醇 | 4×4l/箱 | ah230-4 |
应用编号：af10041
