天津博纳艾杰尔科技有限公司-米乐网页

客服热线:400-606-8099
索取报价
最近加入的产品:
购物车里共有有 0 件产品

(gb 5009.84-2016) 婴幼儿配方奶粉中维生素b1 的测定

应用简介

摘要:本实验以gb 5009.84-2016第一法为依据,用venusil xbp c18(2)色谱柱对婴幼儿配方奶粉中的维生素b1进行了测试。样品在稀盐酸介质中恒温水解、中和再酶解,水解液用碱性铁氰化钾溶液衍生,正丁醇萃取后,经venusil xbp c18(2)色谱柱分离,高效液相-荧光检测器检测,外标法进行定量。结果表明,venusil xbp c18(2)(5 µm,100 å,4.6 × 250 mm)检测维生素b1保留时间稳定且峰形良好,能够满足检测要求。

前言

维生素b1又称硫胺素或抗神经炎维生素或抗脚气病维生素,由嘧啶环和噻唑环通过亚甲基结合而成的一种b族维生素。维生素b1主要存在于种子的外皮和胚芽中,如米糠和麸皮中含量很丰富,在酵母菌中含量也极丰富。瘦肉、白菜和芹菜中含量也较丰富。所用的维生素b1都是化学合成的产品。在体内,维生素b1以辅酶形式参与糖的分解代谢,有保护神经系统的作用;还能促进肠胃蠕动,增加食欲。维生素b1缺乏时,可引起多种神经炎症,如脚气病。维生素b1缺乏所引起的多发性神经炎,患者的周围神经末梢有发炎和退化现象,并伴有四肢麻木、肌肉萎缩、心力衰竭、下肢水肿等症状。在现代医学上,维生素b1制剂治疗脚气病和多种神经炎症有显著疗效。

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

高效液相色谱仪-荧光检测器

试剂材料

正丁醇、铁氰化钾、氢氧化钠、盐酸、乙酸钠、氯化钙均为分析纯;

冰乙酸、甲醇为色谱纯

维生素b1标准品(纯度99%):盐酸硫胺素,cas 67-03-8;

木瓜蛋白酶:应不含维生素b1,酶活力≥800 u(活力单位)/mg;

淀粉酶:应不含维生素b1,酶活力≥3700 u/g;

20 g/l铁氰化钾溶液:称取2 g铁氰化钾,用水溶解并定容至100 ml,摇匀;

100 g/l氢氧化钠溶液:称取25 g氢氧化钠,用水溶解并定容至250 ml,摇匀;

碱性铁氰化钾溶液:将5 ml上述铁氰化钾溶液与200 ml上述氢氧化钠溶液混合,摇匀;

0.1 mol/l盐酸溶液:移取8.5 ml盐酸,加水稀释至1000 ml,摇匀;

0.01 mol/l盐酸溶液:量取0.1 mol/l盐酸溶液50 ml,用水稀释并定容至500 ml,摇匀;

0.05 mol/l乙酸钠溶液:称取6.08 g乙酸钠,加900 ml水溶解,用冰乙酸调节ph为4.0 ~ 5.0之间,加水定容至1000 ml,经0.45 µm微孔滤膜过滤后使用;

2.0 mol/l乙酸钠溶液:称取27.2 g乙酸钠,用水溶解并定容至100 ml,摇匀;

混合酶溶液:称取1.76 g木瓜蛋白酶、1.27 g淀粉酶,加水定容至50 ml,涡旋,使呈混悬状液体,冷藏保存。

样品制备

样品提取

称取3 g ~ 5 g固体试样或者10 g ~ 20 g液体试样于100 ml锥形瓶中(带有软质塞子),加60 ml 0.1 mol/l盐酸溶液,充分摇匀,塞上软质塞子,高压灭菌锅中121℃保持30 min。水解结束待冷却至40℃取出,轻摇数次,用2.0 mol/l乙酸钠溶液调节ph至4.0左右,加入2 ml(可根据酶活力不同适当调整用量)混合酶溶液,摇匀后,置于培养箱中37℃过夜(约16 h),将酶解液全部转移至100 ml容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀,离心或者过滤,取上清液备用。

样品衍生化

准确移取上述上清液或者滤液2 ml于10 ml试管中,加入1 ml碱性铁氰化钾溶液,涡旋混匀后,准确加入2 ml正丁醇,再次涡旋混匀1.5 min后静置约10 min或者离心,待充分分层后,吸取正丁醇相(上层)经0.45 µm微孔滤膜过滤,取滤液于2 ml棕色进样瓶中,待检测。若样品中维生素b1浓度超出线性范围的最高浓度值,应取上清液稀释适宜倍数后,重新衍生后进样。

实验条件

液相条件

色谱柱:venusil® xbp c18(2)  5 µm, 4.6 × 250 mm,100 å

流动相:0.05 mol/l乙酸钠溶液︰甲醇 = 65︰35

荧光检测器检测波长:激发波长375 nm,发射波长435 nm

流速:1.0 ml/min;进样量:10 μl

结果与讨论

实验结果

经图1、图2可知,采用venusil xbp c18(2)色谱柱检测婴幼儿配方奶粉中的维生素b1,峰形良好,保留时间稳定,能够满足实验要求。

图1 维生素b1标准溶液

图2 婴幼儿配方奶粉中的维生素b1

结论

本实验依据gb 5009.84-2016第一法,用venusil xbp c18(2)(5 µm,100 å,4.6 × 250 mm)检测婴幼儿配方奶粉中的维生素b1,并结合液相色谱-荧光检测器对样品进行了检测,结果维生素b1保留时间稳定,峰形良好,说明venusil xbp c18(2)(5 µm,100 å,4.6 × 250 mm)能够用于婴幼儿配方奶粉中维生素b1的检测。

注意事项

按照国标法进行样品前处理时回收率较低,可采用先热超声提取,再经过酸沉淀蛋白后直接衍生化的方法加以改善。热超声时要注意温度的控制,以防止维生素b1遭到破坏。

因维生素b1为强极性化合物实验中应注意流动相比例的确定,且流动相的ph对出峰时间影响较大,因此在每次开始实验前,要调节流动相ph 值到相同的值。

附:相关产品

产品名称

规格描述

包装数量

订货号

venusil xbp   c18(2)

4.6 × 250 mm, 5µm, 100 å

1支

vx952505-2

1.5 ml样品瓶

短螺纹透明带书写处

32 × 11.6 mm

100/pk

1109-0519

1.5ml样品瓶盖

9 mm中心孔蓝盖,红色橡胶/米色ptfe隔垫

45°shore a; 1.0 mm

100/pk

0915-1819

微孔滤膜

尼龙,50 mm,0.45 µm

100片

am025045

应用编号:af10010


  • venusil xbp

    venusil® xbp c18 采用特殊的键合工艺,双封尾,键合密度大,碳含量高,疏水性较高( 极性低),适用于各类非极性化合物分析,在酸或碱性流动相下都有很好的分离效果。

资料名称 资料形式 时间
技术方案 2016年07月12日
产品数量修改成功!
总价为:

登录

x
email
密码
注册找回密码
网站地图