摘要：水中的抗生素经cleanert® ldc(pep-2) 固相萃取柱净化，venusil® mpc18 色谱柱(2.1 × 150 mm，5 μm，100å) 分离，lc/ms/ms，外标法进行定量。结果表明，抗生素添加量为0.02 μg/l时，回收率在60% ~ 120% 之间，能够满足检测要求。
涉及产品：
sciex api 4000 液质联用仪
spe-m08 型正压固相萃取装置
cleanert® ldc (pep-2) 固相萃取柱
venusil® mp c18 液相色谱柱
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
ab sciex api 4000 液相质谱联用仪；
试剂材料
cleanert® ldc (pep-2) 固相萃取柱(1g/200 ml)5% 氨化甲醇：取5 ml 氨水，用甲醇溶解并稀释到100 ml；0.1% 甲酸水溶液：取甲酸0.2 ml，用水溶解并稀释至200 ml；针式过滤器，0.22 μm，直径13 mm；乙腈为色谱纯；实验用超纯水。
样品制备
样品制备：量取500 ml 水样，加入0.25 g edta，用盐酸调节ph 为4.0，待净化。
样品净化：取cleanert® ldc (pep-2)大体积水专用柱 (1 g/200 ml)，依次用9ml甲醇，5 ml 水，5 ml 0.1% 甲酸水(v/v) 溶液活化小柱；将上述待净化液以90 ml/min 流速通过小柱，再用5 ml 水淋洗小柱，抽干15 min；最后用20 ml5% 氨化甲醇（v/v）洗脱，收集；45℃氮气吹干洗脱液，用1 ml 20% 乙腈水（v/v）溶解定容，取上层清液适量过0.22μm 针式过滤器，供lc/ms/ms 检测。
基质混合标准工作溶液配制：取高浓度农药混合标准溶液，用空白样品基质溶液稀释成0.01 μg/ml 的基质混合标准工作溶液。
实验条件
液相色谱条件
色谱柱：venusil® mp c18，5 μm，100 å，2.1 × 150 mm；
流动相：a: 0.1% 甲酸水溶液（v/v）；b: 乙腈，经微孔滤膜过滤；
柱 温：30℃； 进样量：10 μl。
质谱条件
正离子模式
离子源：esi ； 电喷雾电压：5500 v； 雾化气压力：55 psi；
气帘气压力：20 psi；辅助气压力：50 psi； 离子源温度：650℃；
采集方式：多反应监测(mrm)。
负离子模式
离子源：esi-； 电喷雾电压：-3500 v；雾化气压力：60 psi；
气帘气压力：15 psi； 辅助气压力：50 psi； 离子源温度：600℃；
采集方式：多反应监测(mrm)。
梯度洗脱：见表1、表2
表1. 液相色谱梯度洗脱条件
时间/min | 流速/(ml/min) | a/% | b/% |
1.00 | 0.30 | 90 | 10 |
3.00 | 0.30 | 40 | 60 |
5.00 | 0.30 | 5 | 95 |
7.00 | 0.30 | 5 | 95 |
8.00 | 0.30 | 90 | 10 |
20.00 | 0.30 | 90 | 10 |
表2. 负离子模式液相色谱梯度洗脱条件
时间/min | 流速/(ml/min) | a/% | b/% |
1.50 | 0.30 | 85 | 15 |
5.00 | 0.30 | 30 | 70 |
5.01 | 0.30 | 10 | 90 |
6.00 | 0.30 | 10 | 90 |
6.01 | 0.30 | 85 | 15 |
10.00 | 0.30 | 85 | 15 |
质谱参数：见表3
表3. 13种抗生素质谱参数
物质名称 | q1 | q3 | dp/v | ce/v |
红霉素 | 734.6 | 158.1 | 81 | 49 |
576.8 | 86 | 49 | ||
交沙霉素 | 828.3 | 174.3 | 121 | 45 |
109.3 | 126 | 45 | ||
吉他霉素 | 772.4 | 215 | 116 | 41 |
174.1 | 121 | 41 | ||
噁喹酸 | 262 | 244 | 41 | 27 |
216 | 41 | 41 | ||
氟甲喹 | 262 | 244 | 41 | 27 |
202 | 41 | 45 | ||
萘啶酸 | 233 | 215 | 40 | 19 |
187 | 40 | 35 | ||
磺胺吡啶 | 250 | 156 | 65 | 24 |
184 | 65 | 24 | ||
磺胺氯哒嗪 | 285 | 156 | 50 | 23 |
108 | 50 | 35 | ||
磺胺甲嘧啶 | 265 | 156 | 60 | 25 |
172 | 60 | 25 | ||
磺胺甲噻二唑 | 271 | 156 | 50 | 20 |
107 | 50 | 32 | ||
磺胺甲氧哒嗪 | 281 | 156 | 70 | 25 |
215 | 60 | 25 | ||
磺胺对甲氧嘧啶 | 281 | 156 | 70 | 25 |
108 | 70 | 35 | ||
氟甲砜霉素 | 356 | 336 | -78 | -23 |
185 | -78 | -23 |
注：加下划线的即为定量离子对
结果与讨论
实验结果
表4. 水中抗生素加标回收实验结果(添加水平0.02 µg/l)
物质名称 | 平均回收率/% | 变异系数/% | 保留时间/min |
红霉素 | 74.8 | 14.2 | 5.91 |
交沙霉素 | 82.3 | 2.0 | 6.19 |
吉他霉素 | 100.7 | 15.0 | 6.05 |
噁喹酸 | 92.6 | 14.0 | 7.11 |
氟甲喹 | 104.2 | 6.3 | 6.58 |
萘啶酸 | 107.8 | 8.6 | 7.08 |
磺胺吡啶 | 94.9 | 10.7 | 5.65 |
磺胺氯哒嗪 | 75.5 | 0.3 | 6.31 |
磺胺甲嘧啶 | 75.1 | 12.4 | 5.81 |
磺胺甲噻二唑 | 95.5 | 14.1 | 5.98 |
磺胺甲氧哒嗪 | 80.6 | 7.9 | 6.01 |
磺胺对甲氧嘧啶 | 68.3 | 4.6 | 6.19 |
氟甲砜霉素 | 86.3 | 3.9 | 7.07 |
结论：本实验建立了水中抗生素的lc/ms/ms 检测方法，并结合固相萃取技术对水中抗生素的含量进行了测定。对于加标量为0.02 μg/l 的样品进行了检测，回收率在60% ~ 120%，符合要求，固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测水中抗生素的残留量。
实验谱图
图1. 正离子模式0.01 μg/ml混合标准工作溶液lc/ms/ms色谱图
图2. 负离子模式0.01 μg/ml混合标准工作溶液lc/ms/ms色谱图
图3. 正离子模式水基质空白lc/ms/ms色谱图
图4. 负离子模式水基质空白lc/ms/ms色谱图
图5. 正离子模式0.01 μg/ml水基质混合标准工作液lc/ms/ms色谱图
图6. 负离子模式0.01 μg/ml水基质混合标准工作液lc/ms/ms色谱图
图7. 正离子模式0.02 µg/l水中加标lc/ms/ms色谱图
图8. 负离子模式0.02 µg/l水中加标lc/ms/ms色谱图
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil mp c18 | 5 μm，100 å，2.1 × 150 mm | 1支 | va951502-0 |
cleanert ldc(pep-2) | 1 g/200 ml | 4支/pk | lpe000100-2 |
m08型正压固相萃取装置 | 8通道,配置大体积水上样装置 | 1台 | spe-m08 |
15位氮吹仪 | 15位 | 1台 | nv15-m |
保护柱套 | 适用于4.6 × 10 mm和2.1 × 10 mm | 1支 | sh-100 |
直联式保护柱芯 | 5 μm，100 å；2.1 × 10 mm | 4支/包 | va950102-0s |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
针式过滤器 | 单膜，13 mm，0.22 μm | 200个/包 | as021320 |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
甲醇 | 4 l/瓶，色谱纯 | 4 × 4 l/箱 | ah230-4 |
乙腈 | 4 l/瓶，色谱纯 | 4 × 4 l/箱 | ah015-4 |
应用编号：af10078
