普瑞巴林是一种新型钙离子通道调节剂，能阻断电压依赖性钙通道，减少神经递质的释放。该药是一种新型γ-氨基丁酸(gaba)受体激动剂，能阻断电压依赖性钙通道，减少神经递质的释放，临床主要用于治疗外周神经痛以及辅助性治疗局限性部分癫痫发作。
普瑞巴林一般为口服用药，其生物利用率可达到或高于90%。在血浆中的血药浓度约0.04到9.5 μg/ml
材料与方法
普瑞巴林（pregabalin)，分子式c8h17no2 ，分子量159.23，cas : 148553-50-8，pka 4.2和10.6。其结构式见图1。
普瑞巴林化学结构式
本实验使用96孔蛋白沉淀板对血浆样品进行净化：cleanert 蛋白沉淀板(cat: 96cd2025-q, spec: 2ml/well, lot: 150623)，96位正压装置，96孔接收板，venusil mp c18(2) ( 2.1x50mm，5μm，110å )，以上产品均为天津博纳艾杰尔科技有限公司产品；
lc/ms/ms, api 4000 液相色谱-串联质谱仪（sciex）。
血浆为牛血浆。
hplc条件
色谱柱：venusil mp c18（2）( 2.1x50mm，5μm，110 å);
流速：200 μl/min；
柱温：30℃；
进样量：5 μl；
流动相：a-0.1%甲酸水溶液；b-甲醇。
表1. hplc梯度条件
step | total time(min) | flow rate(µl/min) | a (%) | b (%) |
0 | 0 | 200 | 80 | 20 |
1 | 4 | 200 | 80 | 20 |
质谱条件
扫描模式：电喷雾电离正模式；
采集模式：多反应监测（mrm）；
电喷雾电压：4500v；
气帘气（curtain gas）：30；
雾化气（gas 1）：60；
辅助气（gas 2）：30；
离子源温度（tem）：450℃
表2 串联质谱参数
化合物 | 保留时间 | q1 | q3 | dp | ce |
普瑞巴林 | 1.98 min | 160.2 | 142.1(定量) | 50 | 15 |
125 | 50 | 19 | |||
97 | 50 | 21 |
样品处理方法
蛋白沉淀
将50 μl血浆和50 μl甲醇/水（1/1）提前混合。然后向96孔板中加入500 μl甲醇，再将上面混好的血浆加到孔中，用移液器反复抽吸几次或使用漩涡混合器混合；
使用spe-m96正压装置，调节压力，将液体收集到96孔收集板中，3分钟后停止正压装置；
向收集板中各孔中加入400 μl 0.1%甲酸水，混匀，准备检测。
结果与讨论
表3. 血浆中普瑞巴林的回收率情况
加标浓度 (ng/ml) | 平均回收率 (n=8) | rsd (n=8) | lod (ng/ml) |
25 | 96.8% | 3.12% | 0.3 |
100 | 95.9% | 5.05% |
结论
本实验使用蛋白沉淀板对血浆中的普瑞巴林进行了快速提取检测。在25-100 ng/ml浓度下，平均回收率为96.8%和95.9%，rsd值小于5.05%，可以满足相关的检测需求。
订货信息
产品名称 | 规格/包装 | 订货号 |
cleanert 蛋白沉淀板 | 96孔板，2ml/well | 96cd2025-q |
cleanert m96 生物样品前处理仪 | 与96孔板匹配 | spe-m96 |
96位接收板 | 2ml/well，与96孔板匹配 | 96sp2036-2 |
venusil mp c18(2) | 2.1*50mm,5μm,110 å | va950502-2 |
甲醇 | lc-ms级, 4*2.5l | lc230 |
水 | lc-ms级,4*2.5l/箱 | lc365 |
应用编号：yb10008
