类固醇激素又称为甾体激素，是内分泌细胞分泌的高效能生物化学物质。它们在维持生命、调节机体物质代谢、促进性器官发育和维持生育等方面起着重要作用。
类固醇激素在体内的含量较低，对其准确定量具有重要意义。本实验采用cleanert sle对血清样品进行净化，建立了血清中类固醇激素的检测方法，可为临床研究提供参考。
目标物信息
表1 目标物结构信息
名称 | cas | 结构 |
可的松 | 53-06-5 |  |
黄体酮 | 57-83-0 |  |
睾酮 | 58-22-0 |  |
勃地酮 | 846-48-0 |  |
材料
cleanert sle (200mg/3ml)；cleanert m96 生物样品前处理仪；cleanert v96 氮吹浓缩仪；venusil asb c18（2.1*50mm，3μm,150 å）；api 4000 。
样品处理方法
移取200μl血清样品至样品管中，并加入一定体积的甲醇，使溶液中甲醇的含量为5%，摇匀待净化。
将经过预处理的血清样品上样至cleanert sle中，可开启负压装置(真空度＜-0.04mpa)将样品抽过上筛板或使用cleanert m96 生物样品前处理仪将样品压下筛板，待样品全部流至填料中后，静止10min。
在每孔中加入600μl甲基叔丁基醚(mtbe)用于目标物的洗脱，控制洗脱速度为1~2ml/min，在第一次洗脱完成之后，间隔1min再进行第二次洗脱，合并洗脱液。
将合并的洗脱液用96位氮吹仪进行氮吹浓缩，温度设定为40℃，氮吹至近干。
使用200μl乙腈/水（3/7，v/v）将样品进行重溶，摇匀，进样检测。
仪器检测条件
正模式方法（针对黄体酮、睾酮、勃地酮）
hplc条件
色谱柱：venusil asb c18（2.1*50mm，3μm,150 å）
流速：200μl/min
柱温：30℃
进样量：5μl
流动相：水/乙腈（45/55，v/v）
质谱条件
扫描模式：电喷雾电离正模式
采集模式：多反应监测（mrm）
表2 质谱参数
id | 保留时间/min | q1 | q3 | dp | ce |
勃地酮 | 1.66 | 287.3 | 121.3 | 110 | 30 |
287.3 | 135.3 | 109 | 24 | ||
睾酮 | 1.95 | 289.3 | 97.1 | 114 | 30 |
289.3 | 109.2 | 115 | 36 | ||
黄体酮 | 4.16 | 315.4 | 97.1 | 95 | 35 |
315.4 | 109.1 | 95 | 39 |
负模式方法（针对可的松）
hplc条件
色谱柱：venusil asb c18（2.1*50mm，3μm,150 å）
流速：200μl/min
柱温：30℃
进样量：5μl
流动相：水/乙腈（70/30，v/v）
质谱条件
扫描模式：电喷雾电离负模式
采集模式：多反应监测（mrm）
表3 质谱参数
id | 保留时间/min | q1 | q3 | dp | ce |
可的松
| 2.55 | 405.3 | 359 | -60 | -12 |
405.3 | 328.8 | -40 | -18 | ||
405.3 | 300.9 | -55 | -26 |
结果
表4 数据结果
化合物 | 加标回收率-1 | 加标回收率-2 | lod/ng/ml |
黄体酮 | 67.90% | 63.48% | 0.15 |
睾酮 | 86.94% | 78.57% | 0.04 |
勃地酮 | 97.78% | 94.07% | 0.12 |
可的松 | 103.53% | 107.69% | 0.02 |
图1 可的松标准溶液色谱图（浓度为5 ng/ml）
图2 勃地酮、睾酮与黄体酮标准溶液色谱图（浓度为5 ng/ml）
图3 血清样品色谱图（负模式）
图4 血清样品色谱图（正模式）
图5 血清加标样色谱图（负模式-加标浓度为5ng/ml）
图6 血清加标样色谱图（正模式-加标浓度为5ng/ml）
订货信息表
产品名称 | 规格/包装 | 订货号 |
cleanert sle | 96深孔板，200mg/3ml | hc2003-9 |
96孔板负压装置 | 与96孔板匹配 | vm96 |
cleanert m96 生物样品前处理仪 | 与96孔板匹配 | spe-m96 |
cleanert v96 氮吹浓缩仪 | 与96孔板匹配 | nv96-g |
96孔接收板 | 2ml/well，与96孔板匹配 | 96sp2036-2 |
venusil asb c18 | 2.1*50mm，3μm,150 å | vs930502-0 |
乙腈 | hplc, 4*4l | ah015-4 |
水 | lc-ms级，4*2.5l/箱 | lc365 |
应用编号：yb10010
