殷涛：李老师，我测完这五个着色剂了，该你换个柱子继续测。
李飞：好的，殷老师。该我换柱子继续测。今天样品量又多，我又得加班了。
（以上人物均为虚拟人物，如有雷同，纯属意外）
小编说：常见的食品中的10种合成着色剂有柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红和赤藓红。这项检测的特点是：目标物多、样品基质复杂、样品数量多，所以，分析合成着色剂检测的色谱柱应该具备以下几个特点：
能同时分析10种合成着色剂
能在10分钟内完成分析
10种合成着色剂的都具有合格的分离度和对称的峰型
这10种合成着色剂中，柠檬黄和新红这两个化合物出峰时间接近，用gb 5009.35-2016的方法在很多色谱柱上都分不开。agela-飞诺美的hyperclone bds c18（p/n: 00g-4420-e0）色谱柱能完全满足以上3点要求并且将柠檬黄和新红完全分开。
来来来 我们看看具体的实验内容：
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪，紫外检测器；
试剂材料
屈臣氏水；甲醇为色谱纯；乙酸铵为分析纯；
色谱条件
色谱柱：hyperclone bds c18；5µm，130å；4.6×250mm，p/n: 00g-4420-e0
流动相a：0.02mol/l乙酸铵溶液；
流动相b：甲醇；
流速：1.0 ml/min；
柱温：40℃；
进样量：10 μl。
洗脱梯度：
表1.洗脱梯度
时间(min) | a% | b% |
0 | 95 | 5 |
3 | 65 | 35 |
7 | 0 | 100 |
10 | 0 | 100 |
10.1 | 95 | 5 |
21 | 95 | 5 |
结果与讨论
本实验采用hyperclone bds c18色谱柱对10种合成着色剂进行了测定，由表2及图2可知，该色谱柱的检测结果能够满足要求。
图1. 10种合成着色剂254nm高效液相色图谱
图2. 局部放大色谱图
表2. 10种合成着色剂测试结果
样品名称 | 组分 | 保留时间 | 理论塔板数 | 分离度 |
10种合成着色剂 | 柠檬黄 | 4.727 | 39870 | — |
新红 | 4.098 | 42970 | 1.91 | |
苋菜红 | 5.091 | 42380 | 1.89 | |
靛蓝 | 5.429 | 49407 | 3.43 | |
胭脂红 | 6.247 | 59412 | 8.16 | |
日落黄 | 6.763 | 73878 | 5.10 | |
诱惑红 | 7.216 | 89837 | 4.62 | |
亮蓝 | 7.905 | 77862 | 6.56 | |
酸性红 | 8.069 | 106031 | 1.54 | |
赤藓红 | 8.909 | 112594 | 8.17 |
hyperclone bds c18不仅能有优异的分离效果，在耐污染方面也表现优异。用火腿肠基质加标样品连续进样100针，然后测试混合标准溶液来验证这支色谱柱的寿命，实验数据如下：
图3. 10种合成着色剂254nm高效液相色图谱
表3. 10种合成着色剂测试结果
样品名称 | 组分 | 保留时间 | 理论塔板数 | 分离度 |
10种合成着色剂 | 柠檬黄 | 4.687 | 39059 | — |
新红 | 4.870 | 42146 | 1.94 | |
苋菜红 | 5.049 | 42734 | 1.85 | |
靛蓝 | 5.387 | 48618 | 3.46 | |
胭脂红 | 6.195 | 60851 | 8.14 | |
日落黄 | 6.715 | 73299 | 5.20 | |
诱惑红 | 7.172 | 91767 | 4.70 | |
亮蓝 | 7.858 | 76941 | 6.58 | |
酸性红 | 8.022 | 106828 | 1.55 | |
赤藓红 | 8.850 | 120526 | 8.26 |
结论
本实验参考gb 5009.35-2016 《食品中合成着色剂的测定》方法，采用hyperclone bds c18色谱柱对10种合成着色剂对照品溶液进行了测试，结果表明hyperclone bds c18色谱柱适用于国标方法的检测。火腿肠基质加标样品进样100针后检测，hyperclone bds c18仍保持稳定的性能，10种合成着色剂分离良好。
面对复杂食品基质，食品中合成着色剂检测的前处理必不可少，《食品中合成着色剂的测定》(gb/t 5009.35-2016)，采用聚酰胺吸附食品中的合成着色剂，并用乙醇胺溶液进行洗脱。聚酰胺对合成色素的吸附能力会受到温度的影响，实验时需对样品和淋洗液做加热处理，而且乙醇胺浓缩所需时间过长，此方法不适合大批量样品同时处理，且不易做自动化方法移植。研究发现大多数合成着色剂均具有苯磺酸钠结构，经过agela实验室的筛选，选用cleanert pwax（150 mg/6 ml ，p/n:wa1506）混合型弱阴离子交换固相萃取柱，用以吸附食品中的合成着色剂，选用氨化甲醇洗脱，浓缩时间短，可以完成包括赤藓红在内的10种合成着色剂的同时净化，并适用于大批量样品的同时检测 。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
hyperclone bds c18 | 5µm，130å；4.6×250mm | 1支 | 00g-4420-e0 |
cleanert pwax | 150 mg/6 ml | 30/pk | wa1506 |