球虫病是畜牧业生产中最重要，也是最常见的一种原虫病，以对鸡、兔、牛、猪的危害性最大。氯羟吡啶(clopidol)属吡啶类化合物，其商品名为克球粉，具有广泛的抗球虫作用。但是,长期或过量的用药会造成氯羟吡啶在动物体内和组织中的残留和在食物链中的蓄积，对环境及公众健康构成严重的潜在危害。欧盟、美国、加拿大、日本等国都规定了各种动物组织中氯羟吡啶残留最高限量标准。我国规定各种动物组织中氯羟吡啶残留最高限量标准，其中氯羟吡啶在鸡肉中的残留限量为5.0μg/kg。有关动物组织中氯羟吡啶残留检测方法的文献不多，其中以gc/ms法为主。
(1) 样品提取
准确称取试样(5±0.05g)于50ml聚丙烯离心管中，加入15ml乙腈，均质1min，再振荡提取10min，于6000r/min离心10min，取上清液于另一50ml离心管中；用10ml乙腈洗涤刀头，洗涤液倒入残渣中重复提取一次。合并两次上清液，加正己烷15ml，无水硫酸钠2g，振荡提取5min，6000r/min离心5min，取乙腈层于50℃旋转蒸发至近干；用5ml乙腈溶解残留物，作为待净化液，备用。
(2) 净化方法
先将cleanert alumina-n (500mg/6ml)小柱用10ml乙腈活化，取备用液过柱，控制流速为1ml/min，收集上样流出液；用10ml乙腈分两次冲洗放置备用液的离心管，再以相同流速洗脱小柱，并收集洗脱液；将所有流出液与洗脱液于50℃氮气吹至近干；最后用1ml 10%甲醇水溶液溶解残留物，然后涡旋振荡2min，再超声2min，过0.22μm滤膜，待测。
(3) 检测方法
3.1 色谱条件
色谱柱：venusil mp c18，2.1×50mm，2.5μm，100å；
流动相：a相-0.1%甲酸水，b相-0.1%甲酸乙腈
柱 温：30℃；
进样量：10μl；
梯度洗脱：见下表
时间(min) | 流速 (ml/min) | a/% | b/% |
0 | 0.2 | 95 | 5 |
2 | 0.2 | 95 | 5 |
2.01 | 0.2 | 10 | 90 |
3 | 0.2 | 10 | 90 |
3.01 | 0.2 | 95 | 5 |
10 | 0.2 | 95 | 5 |
3.2 质谱条件
离子源：电喷雾离子源 扫描方式：正离子扫描
电喷雾电压：5500 v 雾化气压力：50 psi
气帘气压力：15 psi 辅助气压力：50 psi
离子源温度：450℃ 采集方式：多反应监测(mrm)
q1、q3均为单位分辨率
质谱参数(见表2)
(4) 实验结果
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测氯羟吡啶，加标量为1.0μg/kg、5.0μg/kg加标回收率在78%~90%之间，rsd值小于10%，能够满足检测要求。由图1和图2可看出经cleanert alumina-n固相萃取柱净化，采用venusil mp c18色谱柱检测得到的氯羟吡啶峰形良好，且保留时间稳定。
图1 氯羟吡啶样品加标1.0μg/kg 液相色谱/ 串联质谱质量色谱图：
图2 氯羟吡啶样品加标5.0μg/kg 液相色谱/ 串联质谱质量色谱图：
结论：
本实验建立了氯羟吡啶残留量的lc-ms/ms检测方法，并结合固相萃取技术对猪肉中氯羟吡啶的含量进行了测定。对于加标量为1.0μg/kg、5.0μg/kg的样品进行了检测，回收率为78%~90%，符合检测要求。固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中氯羟吡啶的残留量。
(5) 订货信息：
产品名称 | 规格包装 | 订货号 |
venusil mp c18 | 2.5μm,100å,2.1×50mm | va920502-0 |
cleanert alumina-n | 500mg/6ml,30/pk | al5006-n |
保护柱套 | 适用于4.6×10mm和2.1×10mm | sh-100 |
直联式保护柱芯 | 2.5μm,100å,2.1×10mm | va920102-0s |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写32×11.6mm,100/pk | 1109-0519 |
1.5ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫,45．shore a 1.0mm,100/pk | 0915-1819 |
针式过滤器(nylon) | 13mm,0.22μm,200/pk | as021320 |
一次性注射器 | 2ml两件式 无针头,100/pk | lzsq-2ml |
乙腈uv级 | 4l/瓶,色谱纯 | 015-4 |
正己烷hplc | 4l/瓶,色谱纯 | ah216-4 |
甲醇 | 4l/瓶,色谱纯 | s230-4 |
应用编号：af10038
