甲钴胺是一种内源性的辅酶b12，参与一碳单位循环，在由同型半胱氨酸合成蛋氨酸的转甲基反应过程中起重要作用。体外研究表明，甲钴胺可促进培养的大鼠组织中卵磷脂的合成和神经元髓鞘形成。
表1. 甲钴胺样品信息
样品名称 | 英文名 | 结构式 | 分子式 | 分子量 | cas编号 |
甲钴胺 | mecobalamin |
| c63h91con13o14p | 1344.38 | 13422-55-4 |
实验部分
试剂与材料
试剂材料
屈臣氏水；乙腈为色谱纯；磷酸二氢钾、氢氧化钠为分析纯；
甲钴胺注射液：客户提供；
高效液相色谱柱：durashell c18-am；5 μm，100 å，4.6×250 mm。
样品制备
供试品溶液：避光操作，取本品溶液作为供试品溶液；
供试品对照溶液：取供试品1.0 ml，至100 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品对照溶液；
系统适用性溶液：取甲钴胺对照品约10 mg，置20 ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，光照下放置10 min，作为系统适用性溶液；
含量测定溶液：取本品适量，加流动相溶解并稀释制成每1.0 ml中约含甲钴胺50 μg的溶液；
含量测定对照溶液：取甲钴胺对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1.0 ml中约含甲钴胺50 μg的溶液。
色谱条件
色谱柱：durashell c18-am；5 μm，100 å，4.6×250 mm；
流动相：0.03 mol/l磷酸二氢钾(0.2 mol/l氢氧化钠调节ph至4.5)︰乙腈=84︰16；
检测波长：342 nm；
柱温：35℃；
流速：1.2 ml/min；
进样量：20 μl。
结果与讨论
本实验采用durashell c18-am色谱柱甲钴胺注射液进行了测定，由表2及下图可知，流动相为0.03 mol/l磷酸二氢钾与乙腈，等度洗脱时，待测物峰形良好，且与附近杂质分离度较好。
表2. 不同批次甲钴胺注射液测试结果
峰序号 | 化合物名称 | 保留时间（min） | 理论塔板数 | 拖尾因子 | 分离度 | |
有关物质供试品溶液 | 1 | 甲钴胺 | 12.738 | 9452 | 1.02 | — |
2 | 未知杂质 | 13.917 | 10263 | 0.87 | 2.19 | |
有关物质供试品对照溶液 | 1 | 甲钴胺 | 12.875 | 9355 | 0.98 | — |
含量测定溶液 | 1 | 甲钴胺 | 12.957 | 9275 | 0.96 | — |
甲钴胺对照品含量测定溶液 | 1 | 甲钴胺 | 12.798 | 9441 | 0.95 | — |
图1.甲钴胺注射液有关物质供试品高效液相色谱图(下图为上图的局部放大)
图2. 甲钴胺注射液有关物质供试品对照溶液高效液相色谱图
图3. 甲钴胺对照品含量测定溶液hplc色谱图
图4.甲钴胺注射液含量测定溶液高效液相色谱图
结论
本实验按照中国药典（2015年版 二部）甲钴胺含量测定项下的方法，采用durashell c18-am色谱柱(5 μm，100 å，4.6×250 mm)对甲钴胺注射液进行分离。结果表明，该色谱柱对甲钴胺注射液中有关物质分离效果良好，甲钴胺峰与相邻杂质峰分离度为2.19，符合实验要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
durashell c18-am | 5 μm,100 å, 4.6×250 mm | 1支 | dc952505-am |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32×11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
微孔滤膜 | 单膜，13 mm，0.45 μm | 100个/包 | as021345-t |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
应用编号：ap10133
