前言
土鳖虫，其化学成分主要为挥发油和氨基酸。挥发油总量约22.19%，主为萘，另含各种脂肪醛和芳香醛，占24.95%。还含有二氯苯和二甲基二硫醚等其它中药少见的成分。氨基酸总含量约占40%，人体必需的氨基酸占氨基酸总量的30%以上。另含b-谷甾醇。又从中分得二十八烷醇、十八烷基甘油醚、尿囊素、尿嘧啶；胆甾醇、棕榈酸及5，4￠-二羟基-7-甲氧基黄酮
本实验使用venusil® hilic色谱柱对土鳖虫微粉中尿嘧啶、尿囊素与次黄嘌呤进行了测试。
表1. 有关成分化学信息
样品名称 | 英文名 | 结构式 | 分子式 | 分子量 | cas号 |
尿嘧啶 | uracil |
| c4h4n2o2 | 112.09 | 144104-68-7 |
尿囊素 | allantoin |
| c4h6n4o3 | 158.12 | 97-59-6 |
次黄嘌呤 | hypoxanthine |
| c5h4n4o | 136.11 | 51953-04-9 |
实验部分
仪器、试剂与材料
试剂材料
屈臣氏水；乙腈为色谱纯；
土鳖虫微粉：褐色粉末，由某药科大学提供；
尿嘧啶、尿囊素、次黄嘌呤对照品：无色透明液体，由某药科大学提供；
稀释剂：乙腈︰水=1︰1(v/v)；
高效液相色谱柱：venusil®hilic；5 μm，100 å，4.6 × 250 mm。
样品制备
取土鳖虫微粉0.5 g，加稀释剂25 ml，混匀，超声提取10 min，取上清液经0.45 μm针筒过滤器过滤，取续滤液作为供试品溶液。
色谱条件
色谱柱：venusil®hilic；5 μm，100 å，4.6 × 250 mm；
流动相：乙腈︰水=90︰10 (v/v)；
波长：210 nm；
柱温：25℃；
流速：1.0 ml/min；
进样量：10 µl；
结果与讨论
本实验采用venusil®hilic色谱柱对土鳖虫微粉中尿嘧啶、尿囊素、次黄嘌呤进行了测定，由表2及图2可知，流动相为乙腈和水，等度洗脱时，待测物峰形良好，有关物质分离度较好。
表2.土鳖虫微粉有关物质测试结果
样品名称 | 色谱峰序号 | 化合物名称 | 保留时间/min | 理论塔板数 | 拖尾因子 | 备注 |
对照品 | 1 | 尿嘧啶 | 5.721 | 10458 | 1.00 | 图1 |
2 | 尿囊素 | 8.196 | 9957 | 0.95 | ||
3 | 次黄嘌呤 | 9.455 | 13249 | 0.97 | ||
土鳖虫微粉供试品 | 1 | 尿嘧啶 | 5.747 | 11607 | 1.02 | 图2 |
2 | 尿囊素 | 8.224 | 14947 | 0.99 | ||
3 | 次黄嘌呤 | 9.498 | 14871 | 1.01 |
图1.尿嘧啶、尿囊素、次黄嘌呤对照品溶液高效液相色谱图
图2.土鳖虫微粉供试品溶液高效液相色谱图
结论
本实验相关方法，采用venusil®hilic色谱柱(5 μm，100 å，4.6 × 250 mm)对土鳖虫微粉中尿嘧啶、尿囊素、次黄嘌呤进行了测定。结果表明供试品溶液中主成分尿嘧啶、尿囊素、次黄嘌呤与相邻杂质峰分离效果较好，能够满足检测要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil®hilic | 5 μm，100 å，4.6 × 250 mm | 1支 | vh952505-0 |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫45°shore a；1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
微孔滤膜 | 单膜，13 mm，0.45 μm | 100个/包 | as021345-t |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
乙腈 | 4 l/瓶，色谱纯 | 4×4 l/箱 | ah015-4 |
应用编号：ap10082