前言
呋喃苯烯酸钠属于硝基呋喃类药物，是人工合成的一种广谱抗菌药物，主要用于动物和鱼类的细菌预防和治疗中，有良好的效果。但是，世界卫生组织和联合国粮农组织联合报道硝基呋喃类药物具有潜在的致突变和致癌性。为保护消费者的健康，世界各国纷纷禁止硝基呋喃类药物在食品动物上的使用。然而，这些药物的违法使用现象仍然存在。本文建立了lc-ms/ms法检测动物源性食品中呋喃苯烯酸钠残留，可用于大量进出口样品的监控和检测。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
ab sciex api 4000 液相质谱联用仪
试剂材料
甲醇、乙腈为色谱纯；实验用水为超纯水；氨水为分析纯；
10%氨化甲醇：量取90 ml甲醇，加入10 ml氨水，混匀；
呋喃苯烯酸钠标准工作液：1.0 µg/ml，流动相溶解；
cleanert pep：60 mg/3 ml。
样品制备
量取6 ml 40%乙腈水（v/v，甲酸调至ph为2.0），置于12 ml样品瓶中，加入0.1 ml 10 µg/ml标准品，涡旋震荡溶解，作为待净化液。
样品净化
取cleanert pep萃取柱 (60 mg/3 ml)，依次用3 ml甲醇，3 ml水活化小柱；将上述待净化液上样到小柱上，然后用6 ml水润洗样品瓶，将润洗液也上样到柱上，弃去淋洗液，抽干10 min；最后用5 ml 10%氨化甲醇洗脱，收集；40℃氮气吹至近干，用1 ml乙腈溶解定容，过0.22 µm ptfe针式过滤器后进lc-ms/ms检测。
以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。
色谱条件
液相条件
色谱柱：venusil mp c18(2)，3 µm，110 å，3.0 × 100 mm
流动相：a：0.1%甲酸水；b：乙腈
柱 温：30℃
进样量：5 µl
流 速：0.5 ml/min
质谱条件
离子源：esi-；电喷雾电压：-4500 v；雾化气压力：8 psi；气帘气压力：20 psi；
辅助气压力：45 psi；离子源温度：350℃；采集方式：多反应监测(mrm)。
梯度洗脱：见表1
表1.液相色谱梯度洗脱条件
时间/min | 流速/ml/min | a/% | b/% |
0.00 | 0.5 | 50 | 50 |
2.00 | 0.5 | 20 | 80 |
4.00 | 0.5 | 20 | 80 |
5.00 | 0.5 | 50 | 50 |
质谱参数：见表2
表2. 呋喃苯烯酸钠质谱参数
物质名称 | q1 | q3 | dp/v | ce/v |
呋喃苯烯酸钠 | 258.2 | 213.7 | -60 | -17 |
183.4 | ||||
113.9 |
注：下划线为定量离子
实验结果与讨论
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱串联质谱的方法检测呋喃苯烯酸钠样品，加标回收率为84.7%，能够满足检测要求。由图1 ~ 图3可知，用venusil mp c18（2）色谱柱检测呋喃苯烯酸钠，峰形良好，且保留时间稳定。
表3. 呋喃苯烯酸钠回收实验结果
物质名称 | 平均回收率/% | 变异系数/% | 保留时间/min |
呋喃苯烯酸钠 | 84.7 | 1.8 | 2.92 |
实验谱图
图1. 1.0 µg/ml标准溶液lc-ms/ms色谱图
图2. 萃取柱空白lc-ms/ms色谱图
图3. 标样过柱lc-ms/ms色谱图
结论
本实验建立了呋喃苯烯酸钠的lc-ms/ms检测方法，并结合固相萃取技术对呋喃苯烯酸钠的标样过柱进行了测定。对于标样过柱的样品，呋喃苯烯酸钠回收率为84.7%，变异系数小于10%，能够满足实验要求。说明cleanert pep小柱可以用于呋喃苯烯酸钠的检测，且稳定性良好。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil mp c18（2） | 3 µm，110 å，3.0 × 100 mm | 1支 | va931003-2 |
cleanert pep | 60 mg/3 ml | 50支/pk | pe0603 |
保护柱套 | 适用于4.6 × 10 mm和2.1 × 10 mm | 1支 | sh-100 |
直联式保护柱芯 | 3 µm，110 å；2.1 × 10 mm | 4支/包 | va930102-2s |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹棕色带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0520 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
针式过滤器ptfe | 单膜，13 mm，0.22 µm | 100个/包 | as041320-t |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
qdaura® 卓睿全自动固相萃取系统 | 4通道 | 1台 | spe-40 |
15位氮吹仪 | 15位 | 1台 | nv15-g |
应用编号：af10145
