样品前处理方法
称取2.0 g(精确到0.001 g)样品，置于50 ml离心管中，加入15 ml 1%的三氯乙酸溶液，1000 rpm涡旋混合1 min，于6500 rpm离心5 min，取上清液10 ml，用1mol/lna2hpo4调节ph值为6-7，将溶液通过spe小柱，待样液完全流出后，依次用5 ml水和5 ml 5%甲醇水溶液淋洗，弃去全部流出液。减压抽干小柱5 min，最后用5 ml甲醇洗脱。40℃氮气吹干，用1 ml甲醇水(3:7,v/v)溶液溶解残渣，过0.45μm滤膜，待测。
色谱条件
流动相：a: 水(0.1% 甲酸)，b: 乙腈(0.1% 甲酸)
色谱柱：venusil® mp c18，2.1×50 mm，3 μm(p/n: va931502-0)
柱 温：40 ℃
梯度洗脱
梯度时间表
时间 (min) | 流速 (µl/min) | a (%) | b (%) |
0 | 200 | 90 | 10 |
5 | 200 | 60 | 40 |
8 | 200 | 60 | 40 |
8.5 | 200 | 90 | 90 |
11 | 200 | 90 | 10 |
11.5 | 200 | 90 | 10 |
20 | 200 | 90 | 10 |
质谱条件
离子源: 具备电喷雾接口的turbo v™离子源
极性: 正离子模式，离子源相关参数如下：
cur: 20.0
tem: 450.0
gs1: 60.0
gs2: 60.0
is: 5500.0
化合物离子对信息如下表所示：
名称 | polarity | q1 (amu) | q3 (amu) | ce(ev) |
盐酸四环素 | positive | 445 | 410 | 37 |
428 | 37 | |||
盐酸强力霉素 | positive | 445 | 428 | 37 |
410 | 37 | |||
盐酸土霉素 | positive | 461 | 426 | 27 |
443 | 27 | |||
盐酸金霉素 | positive | 479 | 444 | 29 |
462 | 29 |
同时检测蜂王浆中4中四环素类抗生素总离子流色谱图：
总结
该方法基于(gb/t 23409-2009) ，使用lc-ms/ms法进行蜂王浆中四环素类抗生素的测定，并且通过验证可用于各种 蜂产品基质中四环素的定量、定性分析。数据库经验证适用 于sciex triple quad 3500、3200，4000系列、4500系列、api5000 、5500系列以及6500系列的lc/ms/ms系统。灵敏度高， 重现性好，适用于各相关实验室进行该类物质的日常分析。